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细胞传代培养方法

2019/8/2

细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代；进行一次分离培养称之为传一代。细胞传代培养根据不同细胞采取不同的方法。

（1）贴壁细胞的消化传代

贴壁生长的细胞多用消化法传代，传代中常用到二乙烯四乙酸二钠（EDTA）。EDTA能从组织生存环境中吸取Ca2+、Mg2+，这些离子是维持组织完整的重要因素。但EDTA单独使用不能使细胞完全分散，因而常与胰蛋白酶按不同比例混合使用，效果较好。

消化传代的基本过程：

1.吸除或倒掉瓶内旧培养液，向瓶内加入少量约1～2ml消化液（一般含胰蛋白酶、EDTA），轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面；

2.然后在37℃环境下孵育1-3min，把培养瓶放置显微镜下进行观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即倒掉消化液，加入Hanks液冲洗一次以终止消化；
3.然后加入少许培养液，用弯头吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，使之脱落形成细胞悬液，以1：2或1：3的比例接种在新的培养瓶内。

（2）悬浮细胞的传代

1.悬浮生长的细胞可直接添加新鲜培养液，或离心收集，接种到新培养瓶。
2.通常在4~5天需传代，一般以1:4稀释传代。